酶底物法大肠菌群检测原理（酶底物法大肠菌群检测步骤与特点）

GB/T 5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标新增酶底物法检测总大肠菌群和大肠埃希氏菌。国家环境保护标准HJ1001-2018规定了测定水中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的酶底物法。

一、酶底物法大肠菌群检测原理

1.总大肠菌群

37℃ 培养 24h，产生β-半乳糖苷酶，分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)生成黄色的邻硝基苯酚。

2.粪大肠菌群（又称耐热大肠菌群）

44.5℃培养24h，产生β-半乳糖苷酶，分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)生成黄色的邻硝基苯酚。

3.大肠埃希氏菌（俗称大肠杆菌）

37℃ 培养 24h，产生β-半乳糖苷酶，分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)生成黄色的邻硝基苯酚；同时产生β-葡萄糖醛酸酶，分解选择性培养基中的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）释放出荧光物质（4-甲基伞形酮）。

二、酶底物法大肠菌群检测步骤

1.将大肠菌群检测试剂加入100mL水样中，轻微摇晃使试剂充分溶解。

2.待试剂完全溶解后将水样倒入定量盘中。

3.使用程控定量封口机对51孔/97孔定量盘封口。

4.置于37℃±1℃或44.5℃±0.5℃的恒温培养箱中培养24小时。

5.判读结果

无色=阴性

黄色=总大肠菌群/粪大肠菌群阳性

黄色且荧光=大肠埃希式菌阳性

记录呈阳性的反应孔数，然后对照MPN表计数或可使用自动计数仪判读结果。

三、酶底物法大肠菌群的特点

1.操作简便快速

酶底物法可降低环境或人员操作要求，最快2min完成操作。

2.检测时间短

24h即可完成定性定量分析，无需验证试验。

3.结果判读直观

通过黄色孔和荧光孔颜色变化判定结果。

4.封口机性能稳定

可调整封口温度，连续检测样品，不会出现漏孔、串孔、破孔、漏液情况。

5.结果计数方便快速

全程自动化操作，酶底物法检测微生物可10s内出具结果。